sábado, 30 de junio de 2012






CUESTIONAMIENTOS ÉTICOS DE LA TERAPIA GÉNICA: DEL EXPERIMENTO TUSKEGEE AL 
CASO DE JESSE GELSINGER





El estudio clínico llevado a cabo entre 1932 y 1972 en Tuskegee, Alabama (Estados Unidos), en donde 399 sujetos con sífilis fueron estudiados para observar la progresión natural de la enfermedad durante 40 años 
sin tratamiento, comparado con un grupo de 201 hombres sanos. 


Estos sujetos no dieron su consentimiento informado, no fueron informados de su diagnóstico y fueron engañados al decirles que tenían "mala sangre" y que podrían recibir tratamiento médico gratuito, transporte gratuito a la clínica, comidas y un seguro de sepelio en caso de fallecimiento si participaban en el estudio (Katz, 2008). 
A pesar de que para el año 1947 la penicilina se había convertido en el tratamiento de elección para la sífilis, los responsables del estudio no trataron a los pacientes infectados y ocultaron la 
información disponible sobre la penicilina para continuar estudiando la evolución de la enfermedad. 

Además, forzaron a los sujetos para que evitaran el tratamiento con penicilina, que ya estaba siendo 
utilizada con otros enfermos del lugar, e implementaron prácticas como la punción lumbar, 
haciéndoles creer a los participantes que esto hacía parte del tratamiento. 

                                                                                                El estudio continuó hasta 

1972 y terminó con un saldo de 28 pacientes que murieron de sífilis y otros 100 que murieron de 
complicaciones médicas relacionadas; similarmente, 40 mujeres de la comunidad terminaron 
infectadas y 19 niños que contrajeron la enfermedad al nacer.




viernes, 29 de junio de 2012



MECANISMOS GENÉTICO-MOLECULARES DETERMINANTES DE LA PATOGENIA POR TREPONEMA PALLIDIUM

En cuanto a la virulencia de este treponema, se acepta que los principales factores de virulencia del T. pallidum se relacionan con las siguientes características:




a) La capacidad del microorganismo para transitar por diversas mucosas e invadir el cuerpo del hospedero.

b) Su movilidad tipo "sacacorchos", que promueve el cruce de las capas tisulares.

c) Su capacidad para atravesar placenta.



Los sistemas quimiotácticos de T. pallidum están constituidos por proteínas citoplasmáticas y transmembranales "aceptadoras" de grupos metilo (MCPs, de methyl-accepting chemotaxis proteins). la Mcp1 (66 kDa) y Mcp2 (45 kDa), que resultan indispensables para que el microorganismo sea atraído hacia los nodulos linfáticos de las ingles humanas.

En lo que respecta al proceso de adherencia, diversos estudios experimentales han demostrado que T. pallidum se adhiere con avidez a un amplio espectro de líneas celulares y de muestras de tejidos, con base en la interacción de "ligandos" específicos, presentes tanto en la bacteria como en la célula hospedera.

 En este sentido, todo indicaría que la fibronectina funge como receptor de una molécula presente en los extremos ahusados del microorganismo, la proteína TpN83. 



Otra estructura involucrada en la adhesión treponémica, la TpN92, que posee residuos de serina al final de la región C-terminal, distribuidos a lo largo de un asa situada sobre la membrana externa, los cuales representan sitios de unión entre el hidrógeno de dicho aminoácido y los carbohidratos superficiales de las células hospederas.


jueves, 28 de junio de 2012




Aplicación  de DNA recombinante en T. pallidum



A la respuesta inmune en la línea de ratones BALB/c, de tres péptidos sintéticos obtenidos por tecnologia de ADN recombinante (F 19, F20 y F21), representativos de diferentes proteínas del Treponema pallidum (TmpA, TpN15 y TpN47 respectivamente), así como su reactividad en un ensayo UMELISA. Se lograron conjugar los tres péptidos con BSA a concentraciones aproximadas de 1mg/mL.

Con los péptidos conjugados se inmunizaron ratones de la línea BALB/c y se observó que los títulos fueron superiores a 1/16000, por lo que pueden ser empleados como inmunógenos en la obtención de anticuerpos monoclonales. En el ensayo UMELISA los mejores resultados se obtuvieron con los péptidos sin conjugar.



http://apps.elsevier.es/watermark/ctl_servlet?_f=10&pident_articulo=90000994&pident_usuario=0&pcontactid=&pident_revista=28&ty=103&accion=L&origen=elsevier&web=www.elsevier.es&lan=es&fichero=28v29n02a90000994pdf001.pdf

http://redalyc.uaemex.mx/redalyc/pdf/576/57611567001.pdf

miércoles, 27 de junio de 2012





TÉCNICAS MOLECULARES PARA DIAGNOSTICO DE SÍFILIS 


  1. Tiras inmunocromatográficas
  2. Enzimoinmunoensayos (EIA)
  3. Western blot (WB)
  4. Reacción en cadena a la polimerasa (PCR).


INMUNOCROMATOGRAFIA.- Son membranas de nitrocelulosa donde se colocan péptidos recombinantes de T. pallidum (como los de 47, 17 y 15 kDa.) en líneas separadas y antiglobulina IgG marcada con partículas de oro coloidal, mediante fuerzas capilares las partículas unidas a los analitos migran lateralmente a las denominadas zonas de captura (que es donde estas partículas se unen a los ligandos inmovilizados en la tira).









ENZIMOINMUNOENSAYOS (EIA): detección de anticuerpos antitreponémicos IgG, IgM o ambos (IgG-IgM), éstos han mejorado en sensibilidad y especificidad con el uso de proteínas recombinantes, como TpN15, TpN17 y TpN47.



INMUNOBLOT: WESTERN BLOT: Mediante WB se logra la identificación de un antígeno específico mediante anticuerpos monoclonales o policlonales, por una reacción cromogénica o luminiscente; es importante destacar que este método es altamente sensible, ya que detecta cantidades muy pequeñas de antígeno. Mediante WB para T. pallidum mediante anticuerpos tipo IgM, IgG, o ambos se puede detectar los antígenos más relevantes como TpN15, TpN17, TpN37, TnP45, TmpA, y TpN47(14,19). El WB de tipo IgM es de gran valor para la confirmación de sífilis congénita. 






REACCIÓN EN CADENA A LA POLIMERASA (PCR): El PCR para T. pallidum utiliza cebadores diseñados a partir de fragmentos de ADN del gen TpN47. Se puede realizar a partir de muestras, como líquido amniótico, suero neonatal y LCR neonatal, aunque también se puede usar en sangre y tejidos; permite detectar de 1 a 10 treponemas por muestra.




También se ha diseñado una prueba de RT-PCR (reverse transcriptase-PCR). RT-PCR es la prueba más sensible para detección y cuantificación de ARNm (ARN mensajero). Debido a que los ribosomas son críticos para la función celular e interaccionan con un gran número de otras moléculas, incluyendo el ARN mensajero y el ARN de transferencia (tARN), las secuencias de las moléculas de ARNr están notablemente conservadas a través de la evolución.

martes, 26 de junio de 2012



PRUEBAS CONFIRMATORIAS PARA SÍFILIS

Las pruebas treponémicas, como confirmatorias. 

  • FTA-ABS (fluorescent treponemal antibody absorption test)
  • FTA-ABS de doble coloración y MHA-TP (microhemaglutinación)

Actualmente se realizan generalmente tres o más ensayos simultáneos, para el diagnóstico serológico de la sífilis.






La tecnología de ADN recombinante ha permitido la purificación de antígenos treponémicos como el TpN15, TpN17, TpN47 y TmpA, su clonación y expresión, que han llevado al desarrollo de pruebas de anticuerpos treponémicos de nueva generación como:

  • Enzimoinmunoensayos (EIA)
  • El Western blot (WB)
  • Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)

Los EIA son muy apropiados para procesar grandes volúmenes de muestras, porque pueden ser automatizados, y obtenerse una lectura objetiva generando reportes electrónicamente, con lo que se reduce los errores en la trascripción de datos.



El EIA específico para IgM contra treponema no detecta sífilis tardía, además no debe usarse como tamizaje. 

Sin embargo en la sífilis temprana, la prueba que detecta IgM específico, es la más sensible. El WB treponémico, se ha desarrollado como una alternativa a las pruebas FTA-ABS o MHA-TP para la confirmación del diagnóstico de la sífilis. WB se puede usar para detectar tanto IgG como IgM. 


En los últimos años, se han desarrollado nuevas pruebas basadas en la amplificación de ADN de T. pallidum y la PCR ha incrementado su sensibilidad para detectar T. pallidum a menos de 10 microorganismos, pero es aún una técnica que se realiza básicamente en laboratorios de investigación.






http://revistas.concytec.gob.pe/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1028-71752004000300005
http://redalyc.uaemex.mx/redalyc/pdf/1590/159019356006.pdf
http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S0375-07602006000100015&script=sci_arttext&tlng=pt

lunes, 25 de junio de 2012

PRUEBAS DE SCREENING-TAMIZAJE PARA SÍFILIS



Actualmente existen diferentes técnicas para el diagnóstico serológico de sífilis:

Las no treponémicas (reagínicas) no determinan anticuerpos específicos frente a Treponema pallidum y se basan en antígenos compuestos de soluciones alcohólicas con cantidades determinadas de cardiolipina, colesterol y lecitina. Estas pruebas son: 
  • VDRL (Venereal Research Disease Laboratory)
  • RPR (Rapid Plasma Reagin)
  • TRUST(Toluidine Red Unheated Serum Test)
  • USR (Unheated Serum Reagin)
  • ELISA (Enzimoinmunoensayo). 


Las pruebas treponémicas, en cambio, detectan específicamente los anticuerpos de Treponema pallidum y su utilidad en el laboratorio está orientada a confirmar los resultados arrojados por las pruebas no treponémicas. Las pruebas treponémicas más conocidas son:
  •  FTA-Abs (Inmunofluorescencia indirecta con absorción del suero)
  • FTA-Abs 200DS (Inmunofluorescencia indirecta con absorción y doble tinción)
  • TPHA(Microhemaglutinación)
  • Captia syphilis M (ELISA de captura anti cadena pesada)
  • ELISA IgG
  • WESTERN BLOT

domingo, 17 de junio de 2012




SÍFILIS 


Es una enfermedad crónica trasmitida por contacto sexual, que se caracteriza por lesiones cutáneo-mucosas.


Tiene tres etapas de las cuales el exantema de la etapa secundaria es muy infeccioso. 






Las úlceras aparecen principalmente en los genitales externos, la vagina, el ano o el recto. También pueden salir en los labios y en la boca.




                  Agente Causal.


La sífilis es provocada por Treponema Pallidum.



Es una bacteria tanto anaeróbica como aeróbica. 


Es un organismo Helicoidal sumamente fino y delgado, es considerado un endoflagelos, ya que rodeando su pared, hay microfibrillas que simulan flagelos.