miércoles, 27 de junio de 2012





TÉCNICAS MOLECULARES PARA DIAGNOSTICO DE SÍFILIS 


  1. Tiras inmunocromatográficas
  2. Enzimoinmunoensayos (EIA)
  3. Western blot (WB)
  4. Reacción en cadena a la polimerasa (PCR).


INMUNOCROMATOGRAFIA.- Son membranas de nitrocelulosa donde se colocan péptidos recombinantes de T. pallidum (como los de 47, 17 y 15 kDa.) en líneas separadas y antiglobulina IgG marcada con partículas de oro coloidal, mediante fuerzas capilares las partículas unidas a los analitos migran lateralmente a las denominadas zonas de captura (que es donde estas partículas se unen a los ligandos inmovilizados en la tira).









ENZIMOINMUNOENSAYOS (EIA): detección de anticuerpos antitreponémicos IgG, IgM o ambos (IgG-IgM), éstos han mejorado en sensibilidad y especificidad con el uso de proteínas recombinantes, como TpN15, TpN17 y TpN47.



INMUNOBLOT: WESTERN BLOT: Mediante WB se logra la identificación de un antígeno específico mediante anticuerpos monoclonales o policlonales, por una reacción cromogénica o luminiscente; es importante destacar que este método es altamente sensible, ya que detecta cantidades muy pequeñas de antígeno. Mediante WB para T. pallidum mediante anticuerpos tipo IgM, IgG, o ambos se puede detectar los antígenos más relevantes como TpN15, TpN17, TpN37, TnP45, TmpA, y TpN47(14,19). El WB de tipo IgM es de gran valor para la confirmación de sífilis congénita. 






REACCIÓN EN CADENA A LA POLIMERASA (PCR): El PCR para T. pallidum utiliza cebadores diseñados a partir de fragmentos de ADN del gen TpN47. Se puede realizar a partir de muestras, como líquido amniótico, suero neonatal y LCR neonatal, aunque también se puede usar en sangre y tejidos; permite detectar de 1 a 10 treponemas por muestra.




También se ha diseñado una prueba de RT-PCR (reverse transcriptase-PCR). RT-PCR es la prueba más sensible para detección y cuantificación de ARNm (ARN mensajero). Debido a que los ribosomas son críticos para la función celular e interaccionan con un gran número de otras moléculas, incluyendo el ARN mensajero y el ARN de transferencia (tARN), las secuencias de las moléculas de ARNr están notablemente conservadas a través de la evolución.

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