jueves, 5 de julio de 2012






INVESTIGAN EL DESARROLLO DE UNA VACUNA PARA SÍFILIS

Para el desarrollo de una vacuna contra la sífilis es necesario ubicar la investigación en un contexto genómico e inmunológico. La identificación de proteínas en la superficie de T. pallidum es de gran relevancia, como son las proteínas de membrana externa:


La bioinformática se ha convertido en la herramienta de mayor importancia en el proceso de diseño de nuevas vacunas. Los eventos principales en vacunología reversa son:

  • Disponer de la secuenciación completa del genoma del agente patógeno (p.ej. T. pallidum).
  • Selección in silico o por computadora de genes que expresen proteínas de importancia inmunológica.
  • Clonación de los genes seleccionados y expresión de las proteínas.
  • Purificación de las proteínas recombinantes.
  • Ensayos in vitro e in vivo apropiados.
En la actualidad la vacunación contra la sífilis se ha logrado con relativo éxito en animales de laboratorio con treponemas previamente irradiados.




Una protección parcial se ha logrado con treponemas tratados con antifomina. También se ha intentado la vacunación con treponemas mantenidos a 4 o C y la adición de proteínas recombinantes o nativas de T. pallidum subs. pallidum, como la proteína de 4kD, endoflagelos purificados, las proteínas recombinantes como TmpB, TprK y la 6pd (glicerolfosfodiéster fosfodiesterasa)

martes, 3 de julio de 2012








SÍFILIS Y CÉLULAS MADRE

¿Es posible?


Pacientes con VIH y portadores de sífilis no pueden recibir trasplante de células madre. 








SÍFILIS CONGÉNITA

La infección del producto in útero ocurre cuando la madre presenta espiroquetemia recurrente periódica, y el feto se puede ver afectado dependiendo de la fase del embarazo. El contagio al nacimiento es posible cuando el producto se expone al canal del parto infectado. 

No se ha evidenciado el tratamiento con células madre ya que es innecesario porque la utilización de antibióticos es eficaz.

El empleo de Penicilina G sódica 3-4millones cada 4 horas EV, durante 10-14 días o penicilina procaína 2,4 millones al día durante 10-14 días destruyen el agente y con él a la enfermedad.

domingo, 1 de julio de 2012

Clonacion: Purificación de la proteína recombinante TmpA de Treponema pallidum mediante cromatografía de

afinidad por iones metálicos . 


En la cepa W3110 de E. coli se obtuvieron dos variantes de la proteína de membrana de Treponema pallidum (TmpA-His y TmpA). La TmpA-His fue clonada en un vector que adiciona una secuencia que codifica una cola de seis histidinas en el extremo carboxilo, y su purificación se realizó mediante cromatografía de afinidad por iones metálicos inmovilizados (IMAC, según sus siglas en inglés). 



Se empleó la matriz Sepharose 4B-IDA y los iones metálicos Ni 2+ y Cu 2+ como ligandos. 



Esta cromatografía rápida y de un solo paso, permitió aumentar el grado de pureza inicial de la TmpA-His de 20% hasta 90%. El rendimiento final fue de 70% y la capacidad de carga de la matriz fue de 1 mg/mL. La TmpA se purificó mediante la técnica de electroelución y su recobrado fue de 1 mg por cada corrida cromatográfica. El uso de ambas proteínas en el diagnóstico de la sífilis, se evaluó mediante un ensayo ELISA con el uso de un panel de sueros positivos y negativos. No se encontraron diferencias en relación con el comportamiento serológico de ambos antígenos, lo que sugiere el uso potencial de la TmpA-His en el desarrollo de sistemas diagnósticos para la detección de la sífilis.



sábado, 30 de junio de 2012






CUESTIONAMIENTOS ÉTICOS DE LA TERAPIA GÉNICA: DEL EXPERIMENTO TUSKEGEE AL 
CASO DE JESSE GELSINGER





El estudio clínico llevado a cabo entre 1932 y 1972 en Tuskegee, Alabama (Estados Unidos), en donde 399 sujetos con sífilis fueron estudiados para observar la progresión natural de la enfermedad durante 40 años 
sin tratamiento, comparado con un grupo de 201 hombres sanos. 


Estos sujetos no dieron su consentimiento informado, no fueron informados de su diagnóstico y fueron engañados al decirles que tenían "mala sangre" y que podrían recibir tratamiento médico gratuito, transporte gratuito a la clínica, comidas y un seguro de sepelio en caso de fallecimiento si participaban en el estudio (Katz, 2008). 
A pesar de que para el año 1947 la penicilina se había convertido en el tratamiento de elección para la sífilis, los responsables del estudio no trataron a los pacientes infectados y ocultaron la 
información disponible sobre la penicilina para continuar estudiando la evolución de la enfermedad. 

Además, forzaron a los sujetos para que evitaran el tratamiento con penicilina, que ya estaba siendo 
utilizada con otros enfermos del lugar, e implementaron prácticas como la punción lumbar, 
haciéndoles creer a los participantes que esto hacía parte del tratamiento. 

                                                                                                El estudio continuó hasta 

1972 y terminó con un saldo de 28 pacientes que murieron de sífilis y otros 100 que murieron de 
complicaciones médicas relacionadas; similarmente, 40 mujeres de la comunidad terminaron 
infectadas y 19 niños que contrajeron la enfermedad al nacer.




viernes, 29 de junio de 2012



MECANISMOS GENÉTICO-MOLECULARES DETERMINANTES DE LA PATOGENIA POR TREPONEMA PALLIDIUM

En cuanto a la virulencia de este treponema, se acepta que los principales factores de virulencia del T. pallidum se relacionan con las siguientes características:




a) La capacidad del microorganismo para transitar por diversas mucosas e invadir el cuerpo del hospedero.

b) Su movilidad tipo "sacacorchos", que promueve el cruce de las capas tisulares.

c) Su capacidad para atravesar placenta.



Los sistemas quimiotácticos de T. pallidum están constituidos por proteínas citoplasmáticas y transmembranales "aceptadoras" de grupos metilo (MCPs, de methyl-accepting chemotaxis proteins). la Mcp1 (66 kDa) y Mcp2 (45 kDa), que resultan indispensables para que el microorganismo sea atraído hacia los nodulos linfáticos de las ingles humanas.

En lo que respecta al proceso de adherencia, diversos estudios experimentales han demostrado que T. pallidum se adhiere con avidez a un amplio espectro de líneas celulares y de muestras de tejidos, con base en la interacción de "ligandos" específicos, presentes tanto en la bacteria como en la célula hospedera.

 En este sentido, todo indicaría que la fibronectina funge como receptor de una molécula presente en los extremos ahusados del microorganismo, la proteína TpN83. 



Otra estructura involucrada en la adhesión treponémica, la TpN92, que posee residuos de serina al final de la región C-terminal, distribuidos a lo largo de un asa situada sobre la membrana externa, los cuales representan sitios de unión entre el hidrógeno de dicho aminoácido y los carbohidratos superficiales de las células hospederas.


jueves, 28 de junio de 2012




Aplicación  de DNA recombinante en T. pallidum



A la respuesta inmune en la línea de ratones BALB/c, de tres péptidos sintéticos obtenidos por tecnologia de ADN recombinante (F 19, F20 y F21), representativos de diferentes proteínas del Treponema pallidum (TmpA, TpN15 y TpN47 respectivamente), así como su reactividad en un ensayo UMELISA. Se lograron conjugar los tres péptidos con BSA a concentraciones aproximadas de 1mg/mL.

Con los péptidos conjugados se inmunizaron ratones de la línea BALB/c y se observó que los títulos fueron superiores a 1/16000, por lo que pueden ser empleados como inmunógenos en la obtención de anticuerpos monoclonales. En el ensayo UMELISA los mejores resultados se obtuvieron con los péptidos sin conjugar.



http://apps.elsevier.es/watermark/ctl_servlet?_f=10&pident_articulo=90000994&pident_usuario=0&pcontactid=&pident_revista=28&ty=103&accion=L&origen=elsevier&web=www.elsevier.es&lan=es&fichero=28v29n02a90000994pdf001.pdf

http://redalyc.uaemex.mx/redalyc/pdf/576/57611567001.pdf

miércoles, 27 de junio de 2012





TÉCNICAS MOLECULARES PARA DIAGNOSTICO DE SÍFILIS 


  1. Tiras inmunocromatográficas
  2. Enzimoinmunoensayos (EIA)
  3. Western blot (WB)
  4. Reacción en cadena a la polimerasa (PCR).


INMUNOCROMATOGRAFIA.- Son membranas de nitrocelulosa donde se colocan péptidos recombinantes de T. pallidum (como los de 47, 17 y 15 kDa.) en líneas separadas y antiglobulina IgG marcada con partículas de oro coloidal, mediante fuerzas capilares las partículas unidas a los analitos migran lateralmente a las denominadas zonas de captura (que es donde estas partículas se unen a los ligandos inmovilizados en la tira).









ENZIMOINMUNOENSAYOS (EIA): detección de anticuerpos antitreponémicos IgG, IgM o ambos (IgG-IgM), éstos han mejorado en sensibilidad y especificidad con el uso de proteínas recombinantes, como TpN15, TpN17 y TpN47.



INMUNOBLOT: WESTERN BLOT: Mediante WB se logra la identificación de un antígeno específico mediante anticuerpos monoclonales o policlonales, por una reacción cromogénica o luminiscente; es importante destacar que este método es altamente sensible, ya que detecta cantidades muy pequeñas de antígeno. Mediante WB para T. pallidum mediante anticuerpos tipo IgM, IgG, o ambos se puede detectar los antígenos más relevantes como TpN15, TpN17, TpN37, TnP45, TmpA, y TpN47(14,19). El WB de tipo IgM es de gran valor para la confirmación de sífilis congénita. 






REACCIÓN EN CADENA A LA POLIMERASA (PCR): El PCR para T. pallidum utiliza cebadores diseñados a partir de fragmentos de ADN del gen TpN47. Se puede realizar a partir de muestras, como líquido amniótico, suero neonatal y LCR neonatal, aunque también se puede usar en sangre y tejidos; permite detectar de 1 a 10 treponemas por muestra.




También se ha diseñado una prueba de RT-PCR (reverse transcriptase-PCR). RT-PCR es la prueba más sensible para detección y cuantificación de ARNm (ARN mensajero). Debido a que los ribosomas son críticos para la función celular e interaccionan con un gran número de otras moléculas, incluyendo el ARN mensajero y el ARN de transferencia (tARN), las secuencias de las moléculas de ARNr están notablemente conservadas a través de la evolución.