Clonacion: Purificación de la proteína recombinante TmpA de Treponema pallidum mediante cromatografía de
afinidad por iones metálicos .
En la cepa W3110 de E. coli se obtuvieron dos variantes de la proteína de membrana de Treponema pallidum (TmpA-His y TmpA). La TmpA-His fue clonada en un vector que adiciona una secuencia que codifica una cola de seis histidinas en el extremo carboxilo, y su purificación se realizó mediante cromatografía de afinidad por iones metálicos inmovilizados (IMAC, según sus siglas en inglés).
Se empleó la matriz Sepharose 4B-IDA y los iones metálicos Ni 2+ y Cu 2+ como ligandos.
Esta cromatografía rápida y de un solo paso, permitió aumentar el grado de pureza inicial de la TmpA-His de 20% hasta 90%. El rendimiento final fue de 70% y la capacidad de carga de la matriz fue de 1 mg/mL. La TmpA se purificó mediante la técnica de electroelución y su recobrado fue de 1 mg por cada corrida cromatográfica. El uso de ambas proteínas en el diagnóstico de la sífilis, se evaluó mediante un ensayo ELISA con el uso de un panel de sueros positivos y negativos. No se encontraron diferencias en relación con el comportamiento serológico de ambos antígenos, lo que sugiere el uso potencial de la TmpA-His en el desarrollo de sistemas diagnósticos para la detección de la sífilis.
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